熒光顯微鏡用于研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。 細胞中有些物質,如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。
使用方法:
(1)打開燈源,超高壓汞燈要預熱15min才能達到亮點。
(2)透射式熒光顯微鏡需在光源與暗視野聚光器之間裝上所要求的激發(fā)濾片,在物鏡的后面裝上相應的壓制濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾片、雙色束分離器、壓制濾片的插塊。
(3)用低倍鏡觀察,根據(jù)不同型號熒光顯微鏡的調節(jié)裝置,調整光源中心,使其位于整個照明光斑的中央。
(4)放置標本片,調焦后即可觀察。使用中應注意:未裝濾光片不要用眼直接觀察,以免引起眼的損傷;用油鏡觀察標本時,B須用無熒光的特殊鏡油;高壓汞燈關閉后不能立即重新打開,需待汞燈完全冷卻后才能再啟動,否則會不穩(wěn)定,影響汞燈壽命。
(5)觀察。例如:在熒光顯微鏡下用藍紫光濾光片,觀察到經(jīng)0.01%吖啶橙熒光染料染色的細胞,細胞核和細胞質被激發(fā)產(chǎn)生兩種不同顏色的熒光(暗綠色和橙紅色)。